尊龙凯时提供的人恶性黑色素瘤细胞SK-MEL-2的培养指南，帮助您在实验室中高效、安全地进行细胞培养。以下是详细的培养条件及方法：
一、细胞培养条件
细胞名称：人恶性黑色素瘤细胞SK-MEL-2
生长特性：贴壁生长
冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗
传代方法：首次建议进行1:2的传代，换液频率为每2天。
备注：请使用无菌离心管收集培养基，并留作过渡对比培养，如效果不理想，建议直接购买我们的完全培养基。
二、细胞收到后的处理
收到细胞后，最好将其培养至良好状态，然后用完全培养液灌满细胞瓶并封好瓶口。此为运输细胞的最佳方法。收到细胞后，请用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，之后在超净台内进行无菌操作。同时，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3至4小时，以帮助细胞稳定状态，然后进行后续操作。使用显微镜观察细胞的生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片是售后服务的重要依据。如未提供照片，将默认收到的状态良好。
三、细胞培养步骤
a. 细胞传代
如果细胞汇合度未超过80%，则收集培养液至离心管中，并留5ml完全培养基在37℃、5% CO2孵箱中培养。若细胞密度超80%，可按照以下步骤进行传代：
- 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
- 添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，若大多数细胞变圆脱落，迅速取回，轻敲培养瓶后加入超过5ml的完全培养基终止消化。
- 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，于1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
- 根据1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），并补充新鲜完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。
b. 细胞冻存
- 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液并用PBS洗涤细胞一次。
- 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使其脱落，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
- 弃去上清，沉淀细胞，加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
- 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如需转入液氮罐，请在-80℃冰箱中存放24小时以上后进行转移。
c. 细胞复苏
- 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，确保冻存管内无结晶后，用75%酒精擦拭冻存管外壁。
- 将冻存管中的细胞移入含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
- 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶中，放于37℃、5% CO2细胞培养箱内。
- 次日更换为新鲜完全培养基继续培养。
四、注意事项
部分细胞可能在运输过程中容易脱落，这属正常现象。可按以下方法处理：将培养瓶内的所有培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养。沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，补加1-2ml完全培养基重悬，最后按照1:2比例进行分瓶传代，并放入37℃、5% CO2培养箱中进行培养。
五、售后条款
1）细胞出现问题时，可重发的情况包括：运输途中细胞丢失、瓶身破损、严重漏液等情况，均可重发。收到后如48小时内发现细胞污染，请提供真实性实验结果以进行核实重发。常温发货细胞静置24小时后、干冰发货细胞复苏后如发现大多数细胞未存活（需提供清晰的状态照片），均可重发。其他情况请根据具体问题协调处理。
2）以下情况不予重发：客户自身造成的细胞污染、操作不当致细胞状态不佳、未使用本库推荐的培养体系、未提供前三天的状态照片等。具体情况将依据相应证据与讨论决定。
如需关于人恶性黑色素瘤细胞SK-MEL-2的更多信息和支持，欢迎访问尊龙凯时官方网站。
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