大鼠肺泡巨噬细胞NR8383培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡巨噬细胞NR8383

生长特性：贴壁与悬浮混合生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：F12K+20% FBS + 1% P/S

传代方法：第一次建议1:2传代，每2天更换培养液。

备注：悬浮细胞需通过离心收集；贴壁细胞按标准方法处理，用无菌离心管收集培养基以作过渡培养。

二、细胞处理与运输

收到细胞后，在培养至良好状态时，请用完全培养液灌满瓶口并封好，这样可确保运输过程中的细胞健康。收到细胞时，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，放入超净台内进行无菌操作。随后，将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。显微镜下观察细胞生长情况，并对不同倍率拍照保存（建议40x、100x、200x各一张）。前三天的照片将作为重要的售后依据，如未能提供照片，则默认收到的状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞汇合度未超过80%时，将完全培养液收集至离心管，保留5ml培养基在37℃、5% CO2的孵箱培养；若细胞密度已超80%，则进行传代：

1. 贴壁细胞：
   1. 弃去培养上清，用不含钙镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
   2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱消化1-2分钟，并观察细胞是否已大部分脱落，随即加5ml以上的完全培养基终止消化。
   3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落，吸出悬液转移至15ml离心管，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。
   4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），再补充新培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。
2. 悬浮细胞：

   方法一：通过离心收集细胞，然后补加1-2ml培养液后均匀混合，按1:2的比例转移至新瓶中。

   方法二：可以选择半数换液，弃去一半培养基后，将细胞悬起，并按1:2比例转移至新瓶中。

b. 细胞冻存

1. 当细胞达到培养瓶覆盖80%时，弃去T25培养瓶中的培养液，使用PBS清洗细胞一次。

2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞回缩并变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，再将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。

3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），搅拌均匀并转移至冻存管中。

4. 将冻存细胞密封并直接放入-80℃冰箱，若后期需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），快速置入37℃水浴解冻，直至没有冰晶后，用75%酒精擦拭冻存管外壁。

2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。

3. 弃去上清，加入5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，放回37℃、5% CO2培养箱中培养；次日更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

部分细胞可能在运输过程中易于脱落，这属正常现象。如观察到脱落细胞较多，可以将培养瓶的所有培养液收集至离心管，进行1000RPM离心并收集上清以作过渡培养。再补加胰酶重悬细胞，轻轻处理后加入完全培养基终止反应，再次离心后重悬并按1:2比例传代。

五、售后条款

1）细胞检测问题发生时，可重发的情况包括：

1. 运输过程中细胞丢失、瓶身破损或培养液漏液，均可重发。
2. 如在收到产品的48小时内提供真实的实验结果以证明细胞污染，我们将核实后重发。
3. 常温运输的细胞静置24小时后若复苏率低于正常值（需提供清晰的细胞状态照片），可申请重发。
4. 如细胞于复苏后或静置后出现污染，可申请重发。
5. 细胞活性问题请在收到产品7天内提供实验结果，以台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后重发。
6. 收到细胞当天以及之后的第2、3天请务必拍照记录，若未在3天内告知，我们将视为产品合格。

2）不予重发的情况包括：

1. 客户导致的细胞污染。
2. 客户因操作不当造成的细胞状态异常。
3. 使用非本库推荐的培养体系导致的细胞状态不佳。
4. 若未提供细胞培养前三天的照片，则不予重发。
5. 细胞在培养过程中经过非我们推荐的其他处理。
6. 收到细胞后2天内未告知的情况。

如有其它疑问，请与尊龙凯时客服团队联系。感谢您选择尊龙凯时的细胞产品，我们将竭诚为您服务。