## 研究背景

尊龙凯时的Olink邻位延伸分析（Proximity Extension Assay, PEA）技术非常适合用于高质量多重蛋白质分析，尤其是在来自人类和小鼠模型的类器官、诱导多能干细胞（iPSC）、细胞系和条件培养基等样本中。PEA技术依赖于两种与寡核苷酸偶联的抗体同时结合靶蛋白的邻近位点，使得寡核苷酸能够相互杂交并形成独特的DNA模板，从而通过qPCR进行扩增及最终检测。该技术在多种样本基质中表现出色，仅需1μL样本，故可从人类及动物细胞系中获取重要的生物医学见解，支持包括CRISPR基因编辑研究的多种应用，同时确保数据的高质量。

由于肠上皮细胞的增殖率高，肠道容易受到化疗造成的损伤，而肠上皮损伤又会影响T细胞行为，但其具体机制尚不明确。在本研究中，作者运用基于人类肠道类器官的损伤模型，探讨化疗引起的肠上皮损伤对T细胞行为的直接影响。通过对化疗损伤及未处理的类器官培养基进行PEA蛋白组学分析，为后续利用CRISPR的机制研究提供了指导信息。

化疗后类器官培养基的蛋白组学分析，为后续CRISPR实验评估间质损伤诱导的T细胞活化机制提供了重要数据。其中，Gal-9被认为是肠道损伤和炎症的潜在生物标志物，也是抑制损伤、预防治疗的潜在靶点。后续研究通过使用抗Gal-9阻断抗体或CRISPR/Cas9介导的Gal-9敲除技术，成功防止了肠道类器官损伤引起的T细胞增殖、干扰素-γ的释放和迁移，从而为治疗干预提供了新的策略。蛋白组学分析在CRISPR研究中揭示了疾病的重要分子。

流行病学研究显示，大麻使用与心血管疾病（CVD）风险增加有关，但其机制尚不明确。Δ9-四氢大麻酚（Δ9-THC）是大麻中的活性成分，已知与血管中的大麻素受体1（CB1/CNR1）结合并与CVD风险密切相关。分析英国生物样本库（UKB）数据发现，大麻使用者的心肌梗塞风险显著高于非使用者。同时，Olink蛋白组学Target96炎症面板的结果显示，与动脉粥样硬化和CVD风险相关的细胞因子和趋化因子显著增加。计算机模拟结果表明，染料木黄酮（在大豆中大量存在的异黄酮）能够与CB1受体结合并抑制其活性。

在进一步的实验中，采用人类诱导多能干细胞衍生的内皮细胞，通过NF-κB信号传导模型模拟Δ9-THC诱导的炎症和氧化应激。使用siRNA、CRISPR干扰和染料木黄酮敲低CB1受体的实验结果显示，能够有效减弱Δ9-THC的影响。

伴放线菌聚集杆菌（Aggregatibacter actinomycetemcomitans）是牙周病的主要致病因子，可引发强烈的免疫反应，进而推动疾病发展。NLRP3炎症小体则与牙周病的发展密切相关，但其在感染期间如何调节免疫反应仍不清楚。本研究调查了炎症小体相关蛋白caspase-1、caspase-4和NLRP3在放线菌聚集杆菌感染期间如何调节牙龈上皮细胞的免疫反应。通过CRISPR/Cas9技术构建缺乏NLRP3、caspase-1或caspase-4的人类牙龈上皮细胞（Ca9-22），并采用PEA技术进行了蛋白组学分析。

与NCTC9710菌株相比，JP2菌株HK1651诱导的IL-1β和IL-1RA释放量显著增加，并导致更多的上皮细胞死亡，这些效应依赖于caspase-1、caspase-4和NLRP3的活性。通过Olink Target96炎症面板针对炎症相关蛋白的分析表明，与未受刺激的Cas9和NLRP3缺陷细胞相比，HK1651感染后37种蛋白的表达显著改变。这些发现强化了NLRP3在伴放线菌聚集杆菌感染期间调节免疫反应的重要作用，并为理解该过程提供了新的视角。

通过将CRISPR基因编辑与蛋白组学分析相结合，本研究详细阐明了NLRP3在伴放线菌聚集杆菌感染中的作用，为未来进一步的研究和治疗方案奠定了基础。强烈建议关注尊龙凯时的最新研究进展，以获取更丰富的生物医学资源和创新解决方案。